пятница, 26 июня 2009
13:56

the human behind.
Я не умертвие.
Интересно, я, что, от Меропиной сестры этот желудочный грипп подцепил? Было бы нехорошо.

URL
11:45

the human behind.
Жив.
Отравился, естессн, но бледен, зол и готов к своей чёррррррррртовой презентации. =)
И вообще нефиг-нефиг. Damage control и всё такое.

upd. Адвил - великая вещь. Адвил и массовые расстрелы спасут родину. Шатает по синусоиде, но хотя бы ничего не болит. Как прекрасно жить, когда тебя не разрывает на куски... %)))


URL
четверг, 25 июня 2009
15:18

the human behind.
Кровь кролика. Козлиные антитела. Сухое молоко.
Полнейшая алхимия.

URL
среда, 24 июня 2009
17:58

the human behind.
1. Полудохлые замороженные раковые человеческие клетки.

2. Выдрать из них RNA (все RNA)
- взорвать мембрану (buffer RLT contains detergent)
- выпасть протеины в осадок.
- прокрутить на центрифуге (протеины прилипнут к стенкам пробирки)
- выкачать жидкость, слить на column (пробирку с RNK-фильтром).
- прокрутить на центрифуге.
- промыть дважды (с высоким содержанием этанола) - с центрифугой.
- минуту сушить на центрифуге (dry ran)
- добавить 50 микролитров воды, прокрутить на центрифуге (к этому моменту на фильтре осталось только рнк, соответственно оно и стечёт с водой).
- обрели полное RNK.
- заморозить, ибо оно не стабильно.

3. Опционально: послать RNK на электрогель. Если всё в норме, будут 2 полоски: 50-60 Kbp и 18-20 Kbp, которые подтверждают наличие рибосомных РНК. А если есть рибосомные РНК - скорее всего, пока что все в порядке.

4. Определить концентрацию РНК через спектроанализ.
RNA = OD260 * 40 * Dil
DNA = OD260 * 50 * Dil

5. Выдрать плазмид из бактерии.
взорвать мембрану, выпасть протеины в осадок, крутить не центрифуге, просто использовать column с ДНК-фильтром.

6. Сделать из RNA cDNA и amplify.
cDNA synthesis: 1 cycle of 45-55 C на 15-30 мин, и затем на 94 С на 2 минуты.
PCR amplification: denaturate на 94С (раскрывает ДНК), anneal на 55-60 С, удлиннить на 68-72 С.
Каждый раз - вдвое. Сейчас работают наши праймеры (распознают именно ту РНК, которая нужна).
Полученная сДНК не содержит интронов.

7. Прогнать cDNA на геле.

8. Взять плазмид (вектор) бактерии и cDNA в 2 разные пробирки и добавить в каждый обе enzymes.

9. Ligate - слить вместе, добавить ligase.

10. Добавить в раствор с обычной бактерией, heat shock (открыть мембрану на секунду), ostmotic pressure - чтобы плазмид прополз внутрь бактерии.

11. Кинуть бактерии на амфицелин. Что выживет - содержит плазмид.

12. Сделать из cDNA протеин.

URL
15:09

the human behind.
А ведь большинство постов про лабораторию до дневника не доходит (Паоло и итальянская еда, например). А сегодня - экзамен. И всё, не будет больше Паоло.
Забавная реакция - мне даже не "плевать что ему явно за сорок", он именно таким и прекрасен. Хотя кое-где в манерах - неуловимо совсем, почти как у мехматовцев, которым под шестьдесят - проскакивает, какими они были в молодости. Слишком органично смотрится итальянец сидящим на высоком столе, со своими яркими жестами - так и видится, как он бы сидел на заборе и был явной шпаной, с роскошной чёрной шевелюрой и невыносимо правильными чертами лица. "Godfather Paolo" - хмыкнул Тодд, когда мы возвращались вчера к парковке. Именно так. И "fairy godmother" Брайан - А. его так называет за то, что он как фея-крёстная всегда может выдать необходимые реагенты.

URL
14:18

the human behind.
Ок. Я падок на дешёвые сенсации. Не каюсь. На самом деле обратная сторона медали: когда с чем-то работаешь с 9 до 5, перестаёшь на эту тему напрягаться. Ну, вирусы малярии и кори в лаборатории, и что?..

Но вот Брайан меня вынес вперёд ногами однозначно и нафиг. Рассказал, что на первой работе они имели дело с black plague. В смысле, тестировали новые антитела против ряда болезней.. ну и в их числе чуму. Ту самую, которая выкосила когда-то треть Европы. У меня глаза на лоб вперёд и с песнями полезли: вот этот абсолютно кошмарный тип, который жонглирует пробирками и вообще проявляет поистине детское любопытство ко всему - и держит в руках пробирку с бактерией чумы. Очуметь.

URL
вторник, 23 июня 2009
13:28

the human behind.
Аманда пригласила меня на ужин. В обществе её жены. Третьего июля. Там же будет Ник и их кошшшшшки-сс. Мило...)
Брайан пытался нас потравить: сидит человек и меланхолично крутит краники газа в лаборатории. Страшный человек.
Паоло опять выдал аллегорию про мужчин и женщин (антитело распознаёт свой протеин в толпе других протеинов так же, как ваша жена распознает вас и подойдёт именно к вам) .. на что Аманда беззвучно пробормотала, что, видимо, не везёт нашему профессору в личной жизни. He's got shafted - сказала она.

Достойный финал: выходим из класса, что-то обсуждая.. И Тодд так задумчиво изрекает: "Знаете, всё, что мы здесь обсуждаем, крутится вокруг трёх тем: еды, женщин и алкоголя!"

URL
понедельник, 22 июня 2009
20:24

the human behind.
Лаааааба. Сегодня. Пробирки. Синтез протеина. Чувствую себя нарком, дорвавшимся до дозы.
Чиби сказал, что мои рыдания на тему того, какие все sexy & smart в лаборатории похожи на писки малолетних фанатов в адрес рок-певцов - вызывают столько же отвращения. Ну-ну. Фильтровать их здесь, что ли? Или доступ ему ограничить к записям, чтобы не раздражать?

Моё восхищение лаком тоже вызывает у него столько же бурчания. А лак обалденный: серо-стальной, цвета пасмурного неба / жемчуга, едва-едва матово-розоватый, такой кошмарный, как тёмные нависшие тучи (едва-едва жемчужно-алыый - намёком).

Настолько sick & tired, что пофиг.

Давеча вспоминал, как мы с Кроном (не в последний приезд, раньше) отчесали по набережной Москва-реки. Было здорово.. Было правда очень здорово. Длиииин-ная-длинная прогулка. И говорить - не останавливаясь. И слушать. Уютно.

И как с Кеном - всё ВДНХ. Римская империя времени упадка. Сами здания, Римская архитектура, пространство.. существуют там совершенно отдельно от людей. Здания, медный свет, воздух. Вера людей, которые это строили. Совершенно отдельно от людей, которые там невтемно ходят теперь по шмоткам. А - красиво.

URL
13:19

the human behind.
Рисунки фона невыносимо прекрасны. Ыыы.
..Кен - коварный соблазнитель (см. его пост о девушках из похоронного бюро... пардон, нотариальной конторы).

А зато я - одичавший монах. И единственное, о чём я жалею - это о том, что паладины не дерутся посохом... Ну, и что лаба скоро закончится.

URL
пятница, 19 июня 2009
21:19

the human behind.
Cовершенно невыносимо хочу завести котёнка - мелкого, глазааастого, встопорщенного и своенравного. И ласкового.
И тут же мозгами понимаю, что на самом деле просто безумно скучаю по Кену (который кроме этих характеристик отличается ещё массой достоинств, етсессн) и блин когда уже наконец.

URL
20:41

the human behind.
Полнейшая страусиная политика. Через какие-то 11 дней я задам вопрос из серии "да-нет".. и я всё так же абсолютно не готов его задавать - наоборот, готов залить в уши расплавленный чугун, чтобы только не слышать ответа, потому что не готов к одному из вариантов ну совершенно ни в какую.
Но при этом совершенно этого не ощущаю. Не чувствую. Даже страха не чувствую. Здравствуй, отрицание по Фрейду, я тебя тоже очень люблю.

Самое забавное..
Если повезёт, то эта ситуация будет повторяться раз в полгода ещё очень долго. Если повезёт.

Мне даже не страшно и не холодно, мне ваще никак. =) Гордиться абсолютно нечем, правда.

URL
17:08

the human behind.
Аманда рассказывала.
Ей 35 лет, она жената. Жена её попала под сокращение, лишилась медицинской страховке. По счастью, живут они в штате Массачусетс, который признаёт однополые браки, и Аманда смогла записать жену на свою мед. страховку.
А дальше началось всё самое интересное. Штат браки признаёт. Страховка - признаёт. А федеральное правительство - не признаёт. Так что федеральное правительство требует с неё больше налогов, чем надо (деньги, идущие на страховку, налогом не облагаются - но фед. правительство отказывается видеть, что она платит несколько тысяч в год на страховку своей жены).
И теперь у неё на tax return 2 разные цифры общего дохода: одно - на штатном уровне, второе - на федеральном. Со всеми вытикающими оттуда зануднейшими волокитами.

Идиотизм? Идиотизм чистой воды. И подобная бюрократическая путаница в документах её преследует по куче разных инстанций.

Нью-Хемпшир провёл потрясающий социальный эксперимент: несколько лет там регистрировались "партнёрства" вместо браков. Как показала практика, даже если в могзах законодателей "партнёрство" геев не должно было де-юро ничем отличаться от брака мужчины и женщины, втолковать это страховке, госпиталю, работе, и т.п. - не оказалось возможным. Де-юро - слишком много мелких подводных камней, о которые спотываютсяя "партнёрства". Слишком много и долго. Поэтому Нью-Хемпшир недавно тоже узаконил однополые браки.

Ну и вот. =) В общем, понятно, да? В Канаду, в Канаду. Там браки признают.

URL
четверг, 18 июня 2009
03:55

the human behind.
Мне снился сон. Я был мечом,
Прохожим и его плащом.
Удавкою и кирпичом.
И даже кочергой.


Все фигня кроме пчел. Пора бы наконец это понять.

URL
среда, 17 июня 2009
03:19

the human behind.
Ок. По ссылке не ходить. Иначе и с ума можно сойти.
Метр шестьдесят пять of wickedness & hotness & brain power & sense of humor в одном флаконе.
Как хорошо, что моя лаба заканчивается на след. неделе. %)) И что я быстро всё забываю.))

Разговаривали сегодня с Амандой за жизнь. Безумно интересно - и 2 года из жизни, и математика (она PhD), и про бойфренда она рассказывала (18-24 - шесть лет встречалась с мальчиком, а потом обоюдный coming out). Наша лаба - набор совершенно офигенных образов. Ыыы.


URL
вторник, 16 июня 2009
20:10

the human behind.
Нарк.
Нда, наверное, я совсем себе взрослый буратино - мне не нужны слова. Цели поставлены, задачи ясны - за работу, товарищи. (с)
В смысле, бывают, видимо, такие моменты, когда трепаться не о чем, надо просто работать во исполнение своих целей. И это хорошо. И это - есть чем гордиться. Когда на работе успеваешь всё, а потом на 4 часа сплошного блаженства посередь пробирок, спектрофотометров, холодильников и стабилизаторов, вкупе с установкой ультрафиолетового излучения, и т. п.

Пойду-ка я к мануалу.




URL
17:05

the human behind.
Всё-таки хорошо, что лаб - только 2 раза в неделю. Как я вынесу три на следующей неделе - неизвестно.
Сдал вчера нашей лес. бутерброд с салатом из яйца (она вегитарианка). Получил сегодня благодарственный е-мейл, сижу, лыблюсь. Она милая и тихая *девочка*, пусть 35 и докторская по математике. Кстати, хорошо знает Мелроуз (Беккет так и вообще, оказывается, там 20 лет жил, но уехал) - рекомендовала мне мексиканскую кафешку.

Вчерашний эксперимент с треском провалила вся лаба. Очешуеть. Сегодня будем обрабатывать другие колонии, но скорее всего, начудили с ligation - склеенный плазмид получился не 6600, а 5600 по длине и посему нашего гена не содержит. Грустно. Зато было несколько зашибенных результатов на геле (один гель кое-кто уронил на пол, выпендриваясь, на другом три вообще пустых полоски, на третьем совершенно невероятная ёлочка - чёрти-что).

Паоло импозантен и прекрасен настолько, что мурашки по коже. Ыыыыыы, как он умеет сидеть, да где ж мой фотоаппарат! Чувство, словно торчу в музее перед картиной. Лет ему явно за сорок, туда к 50 поближе скорее всего, но как он держится - это надо видеть. Сила, ум, полное "включение", поглощён работой и прекрасно преподаёт. Ыыы. Ыыыыыы.

Вот поэтому и хорошо, что лаб только 2 раза в неделю - я и так уже непозволительно сильно привязался к этим людям, отвяжусь-то легко (как и всегда) - но не хотелось бы привязываться сильнее.

URL
15:15

the human behind.
- Were you guys actually looking for the mike?
- No.- He's as shameless and self-confident as ever. - I just could not resist it.

Да-да. Беккет нашел в нашей лаборатории микрофон. И не смог устоять перед тем, чтобы его врубить и сказать несколько пафосных фраз.

- So, you have 3 samples from the three colonies. Now get the uncut sample; and put it into the small tube (tube = пробирка). This will be your U-tube.

URL
15:11

the human behind.
Если открываться кому ни попадя, будешь пустой консервной банкой.

URL
пятница, 12 июня 2009
17:37

the human behind.
По последним данным разведки, мы воевали с собой.. (с) )

URL
17:27

the human behind.
У *** завелись котята. В дровах. Безумно хотца одного взять.. %)
Мантра года: "нам не страшен паладин, нас пятнадцать - он один".



URL